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高纯度质粒小提试剂盒
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品牌:尚宝生物
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产地:上海
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高纯度质粒小提试剂盒产品货号:26210
产品规格:50 次/100 次/200 次
产品简介:
本试剂盒适合提取 1-5 ml 菌液,在碱裂解法裂解细胞的基础上,采用独特的硅基质膜吸附技术和试剂配方,通过离心吸附柱在高盐状态下高效专一的结合溶液中的质粒 DNA,每个吸附柱最高可吸附30 μg 的质粒DNA,并最大限度的去除蛋白质、基因组、RNA 和其他杂质。得到的质粒 DNA 可直接用于细胞转染、PCR、酶切、测序、连接等生物学实验。
包装清单:
产品名称 50 次包装 100 次包装 200 次包装储存条件Buffer P1 15ml 30ml 55ml 室温Buffer P2 15ml 30ml 55ml 室温Buffer N3 20ml 40ml 75ml 室温Buffer PB 30ml 55ml 110ml 室温Buffer PE 9ml 18ml 36ml 室温Buffer EB 5ml 10ml 20ml 室温Spin Columns 50 个 100 个 200 个 室温Collection Tubes 50 个 100 个 200 个 室温自备试剂:使用前 Buffer PE 50 次加入 36ml 无水乙醇/100 次加入 72ml 无水乙醇/200 次加入144ml 无水乙醇操作步骤:
1. 取-5 ml 过夜培养的菌液加入离心管(自备)中,12000 rpm 离心 30 秒收集菌体沉淀,尽量吸弃上清。2. 向留有菌体沉淀的离心管中加入 250μl Buffer P1,使用移液器或涡旋振荡器充分混匀,悬浮菌体沉淀。注意:如果菌块未彻底混匀,将会影响裂解效果,导致提取量和纯度偏低。
3. 向离心管中加入 250μl Buffer P2,温和地上下颠倒混匀 4-6 次,充分混匀使菌体裂解,此时溶液应变得清亮粘稠。
注意:温和混匀,不要剧烈震荡,以免打断基因组 DNA,造成提取的质粒中混有基因组DNA片段。4. 此步骤所用时间应不超过 5 分钟,避免质粒受到破坏。
5. 向离心管中加入 350μl Buffer N3,立即温和地上下颠倒混匀 8-10 次,充分混匀,此时应出现白色絮状沉淀。12000 rpm 离心 5 分钟。
注意:Buffer N3 加入后应立即混匀,避免产生局部沉淀。
6. 将步骤 4 中所得的上清液转移到已装入收集管的吸附柱(Spin Columns)中,12000 rpm离心30 秒钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
7. 向吸附柱中加入 500μl Buffer PB,12000 rpm 离心 30 秒。
8. 向吸附柱中加入 750μl Buffer PE(请先检查是否已加入无水乙醇),12000 rpm 离心1 分钟,倒掉收集管中的废液。
9. 将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中,向吸附膜的中间部位加入 50μl BufferEB,室温放置1 分钟,12000rpm 离心 1 分钟,将质粒溶液收集到离心管中。-20℃保存质粒。
注意:
1. 为了增加质粒的回收效率,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,室温放置 2 分钟,12000 rpm离心1分钟,将质粒溶液收集到离心管中。
2. 质粒拷贝数较低或>10 kb 时, Buffer EB 在 65-70℃水浴预热,可以增加提取效率。注意事项:
1. 前若发现 Buffer P2、Buffer N3、Buffer PB 有沉淀,可在 37℃水浴几分钟,即可恢复澄清(请勿剧烈晃动Buffer P2)。
2. 第一次使用前应按照说明在 Buffer PE 中加入 144ml 无水乙醇。
3. 注意不要直接接触 Buffer P2 、Buffer N3 和 Buffer PB,使用后应立即盖紧盖子。4. 提取质粒的量和纯度与细菌培养浓度、菌株种类、质粒大小、质粒拷贝数等因素有关

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